第三届清华大学结石论坛ldquo水木 [复制链接]

广金钱草总*酮抑制大鼠肾草酸钙结石形成及其抗氧化作用机制

周建甫，汪茜，李静，张秋红，向松涛

(广州中医药医院泌尿外科，广东广州，)

目的：我们前期探讨了广金钱草水提取液、不同极性溶剂活性部位对大鼠肾草酸钙结石形成的抑制效果，本研究进一步从正丁醇活性部位提取分离广金钱草总*酮（TFDS），并探讨TFDS对大鼠肾草酸钙结石形成的抑制作用及其可能的抗氧化机制。

方法：采用乙醇回流提取，大孔吸附树脂富集纯化广金钱草总*酮，通过LC-MS/MS进行质量控制。建立新型L-羟脯氨酸（HLP）喂饲法诱导的大鼠肾草酸钙结石模型，将大鼠随机分成5组，即空白组、TFDS对照组（mg/kg/d）、模型组、TFDS低剂量治疗组(mg/kg/d)、TFDS高剂量治疗组(mg/kg/d)，每组8只。实验28天后，记录大鼠一般情况，收集尿液分别检测尿量、pH值、尿结晶、尿镁、尿钙、尿肌酐、尿蛋白、尿草酸和柠檬酸，经腔静脉采血分别检测血肌酐、血尿酸氮，取肾脏组织制片进行病理分析，通过HE染色和钙盐染色显微镜观察肾结石的形成，免疫组化法观察结石相关蛋白OPN、MCP-1和TGF-β蛋白在肾脏中的表达，匀浆组织用ELISA法分别检测脂质过氧化产物MDA和抗氧化酶SOD、GSH-Px、CAT的含量。

结果：提取、分离得到纯度为68.34%的广金钱草总*酮，LC-MS/MS分析证实样品含有夏佛塔苷、异荭草苷和异牡荆苷等含量较大的*酮类单体成分。（1）一般及生化指标：模型组大鼠摄食量、体重量增加比例降低，但肾重量、饮水量、尿量均显著增加，应用TFDS增加了大鼠的摄食量和体重量，同时降低肾重量、饮水量和尿量；模型组尿pH值、尿镁、尿钙等较空白组、TFDS对照组显著下降，应用TFDS可增加大鼠的尿PH值、尿镁、尿钙；此外，模型组尿草酸排泄量显著增加而柠檬酸量减少，应用TFDS可减少尿草酸的排泄，增加尿柠檬酸量；模型组血肌酐升高，TFDS治疗降低了血肌酐水平。（2）结石形成指标：模型组大鼠肾组织草酸钙结石、尿结晶分布较空白组、TFDS对照组显著增加（P0.01），应用TFDS减少了肾组织草酸钙结石的形成及尿结晶的排出（P0.01），且高剂量组较低剂量组效果更优；与此同时，模型组肾小管上皮损伤较重、大量炎症细胞浸润，TFDS治疗组的病理损伤明显减轻。（3）免疫组化指标：MCP-1、OPN和TGF-β蛋白在空白组和TFDS对照组均为弱表达，而模型组的表达则显著增强，应用TFDS可使MCP-1、OPN和TGF-β蛋白表达显著减少。（4）氧化应激指标：模型组MDA显著升高，而SOD、CAT、GSH-Px均不同程度降低，提示了模型组氧化应激损伤，应用TFDS降低MDA的水平，同时增加SOD、CAT、GSH-Px的含量，提示TFDS具有过氧化损伤的保护作用。

结论：大孔吸附树脂富集纯化TFDS工艺成熟、稳定，HLP喂饲法造模较传统乙二醇联合氯化铵效果更稳定。TFDS可抑制大鼠肾草酸钙结石的形成，其机制可通过减弱肾小管上皮过氧化损伤以及降低尿草酸、增加尿钙排泄等多环节起作用。

关键词:广金钱草总*酮；草酸钙结石；L-羟脯氨酸；氧化应激

个人简历

周建甫，医院泌尿外科医师，医学硕士。年遴选香港中文大学访问学者，广东省泌尿生殖协会男性健康管理学分会委员。从事泌尿外科/男科疾病腔镜微创手术及中西医结合诊疗，主攻前列腺癌、尿石症分子生物学及实验药物治疗学研究。主持广东省自然科学基金博士启动项目、广州中医药大学“高水平大学建设”项目各1项，参与省、市等各级科研项目多项，在国内外专业期刊发表学术论文数篇。